શ્રેષ્ઠ એકાગ્રતા કેવી રીતે નક્કી કરવી?
પ્રેરક IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside) માટે, સાંદ્રતા જેટલી વધારે છે, તેટલું સારું.શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા ચોક્કસ પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓ અને ઇચ્છિત ઇન્ડક્શન અસર પર આધારિત છે.
સામાન્ય રીતે, IPTG ની સાંદ્રતા 0.1-1 એમએમની રેન્જમાં વપરાય છે.ઓછી સાંદ્રતા કોષની વૃદ્ધિ પર પ્રતિકૂળ અસરો ઘટાડી શકે છે અને લક્ષ્ય પ્રોટીનની અતિશય અભિવ્યક્તિને કારણે સાયટોટોક્સિસિટી ઘટાડી શકે છે.ઉચ્ચ સાંદ્રતા કોશિકાઓના અતિશય મેટાબોલિક બોજનું કારણ બની શકે છે, જે કોષની વૃદ્ધિ અને અભિવ્યક્તિ કાર્યક્ષમતાને અસર કરે છે.
શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા નક્કી કરવાની રીત વિવિધ સાંદ્રતામાં IPTG ઇન્ડક્શન પરીક્ષણો હાથ ધરીને લક્ષ્ય પ્રોટીનના અભિવ્યક્તિ સ્તરનું મૂલ્યાંકન કરી શકે છે.IPTG સાંદ્રતાની શ્રેણી (દા.ત. 0.1 એમએમ, 0.5 એમએમ, 1 એમએમ, વગેરે) નો ઉપયોગ કરીને નાના-પાયે સંસ્કૃતિ પરીક્ષણો કરી શકાય છે અને વિવિધ સાંદ્રતા પર અભિવ્યક્તિ અસરનું મૂલ્યાંકન લક્ષ્ય પ્રોટીનના અભિવ્યક્તિ સ્તરને શોધીને કરી શકાય છે (દા.ત. વેસ્ટર્ન બ્લોટ અથવા ફ્લોરોસેન્સ ડિટેક્શન).પ્રાયોગિક પરિણામો અનુસાર, શ્રેષ્ઠ અભિવ્યક્તિ અસર સાથેની સાંદ્રતાને શ્રેષ્ઠ એકાગ્રતા તરીકે પસંદ કરવામાં આવી હતી.
આ ઉપરાંત, તમે સમાન પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓ હેઠળ સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતી IPTG સાંદ્રતા શ્રેણીને સમજવા માટે સંબંધિત સાહિત્ય અથવા અન્ય પ્રયોગશાળાઓના અનુભવનો સંદર્ભ પણ લઈ શકો છો અને પછી પ્રાયોગિક જરૂરિયાતો અનુસાર ઑપ્ટિમાઇઝ અને એડજસ્ટ કરી શકો છો.
એ નોંધવું અગત્યનું છે કે શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા વિવિધ અભિવ્યક્તિ પ્રણાલીઓ, લક્ષ્ય પ્રોટીન અને પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓના આધારે બદલાઈ શકે છે, તેથી કેસ-દર-કેસ આધારે ઑપ્ટિમાઇઝ કરવું શ્રેષ્ઠ છે.
પોસ્ટ સમય: સપ્ટેમ્બર-28-2023