ડિથિઓથ્રેઇટોલ (ડીટીટી) એ સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતું ઘટાડતું એજન્ટ છે, જેને નવા ગ્રીન એડિટિવ તરીકે પણ ઓળખવામાં આવે છે.તે બે મર્કેપ્ટન જૂથો (-SH) સાથેનું એક નાનું મોલેક્યુલર કાર્બનિક સંયોજન છે.તેના ઘટાડતા ગુણધર્મો અને સ્થિરતાને લીધે, ડીટીટીનો બાયોકેમિસ્ટ્રી અને મોલેક્યુલર બાયોલોજી પ્રયોગોમાં વ્યાપકપણે ઉપયોગ થાય છે.
ડીટીટીની મુખ્ય ભૂમિકા પ્રોટીન અને અન્ય બાયોમોલેક્યુલ્સમાં ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડ ઘટાડવાની છે.ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડ એ પ્રોટીન ફોલ્ડિંગ અને સ્થિરતાનો એક મહત્વપૂર્ણ ભાગ છે, પરંતુ કેટલીક પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓમાં, જેમ કે રિડ્યુસિબલ SDS-PAGE પૃથ્થકરણ, પ્રોટીન રિકોમ્બિનેશન અને ફોલ્ડિંગ, ની અવકાશી રચનાને ઉઘાડી પાડવા માટે ડાઈસલ્ફાઈડ બોન્ડને બે થીઓલ જૂથોમાં ઘટાડવું જરૂરી છે. પ્રોટીન.ડીટીટી ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડ્સ સાથે પ્રતિક્રિયા આપી શકે છે જેથી તે તેમને મર્કેપ્ટન જૂથોમાં ઘટાડી શકે, આમ પ્રોટીનનું અવકાશી માળખું ખોલે છે અને તેનું વિશ્લેષણ અને હેરફેર કરવાનું સરળ બનાવે છે.
ડીટીટીનો ઉપયોગ એન્ઝાઇમની પ્રવૃત્તિ અને સ્થિરતાને બચાવવા માટે પણ થઈ શકે છે.કેટલીક એન્ઝાઇમ-ઉત્પ્રેરિત પ્રતિક્રિયાઓમાં, ઓક્સિડન્ટ દ્વારા એન્ઝાઇમની પ્રવૃત્તિમાં ઘટાડો થઈ શકે છે.ડીટીટી ઓક્સિડન્ટ્સ સાથે પ્રતિક્રિયા કરી શકે છે જેથી તે હાનિકારક પદાર્થોમાં ઘટાડો કરે, ત્યાં એન્ઝાઇમની પ્રવૃત્તિ અને સ્થિરતાને સુરક્ષિત કરે છે.
β-mercaptoethanol (β-ME) જેવા પરંપરાગત રિડ્યુસિંગ એજન્ટોની સરખામણીમાં, DTT એ સુરક્ષિત અને વધુ સ્થિર રિડ્યુસિંગ એજન્ટ માનવામાં આવે છે.તે માત્ર જલીય દ્રાવણમાં જ સ્થિર નથી, પરંતુ ઉચ્ચ તાપમાન અને એસિડ-બેઝ પરિસ્થિતિઓમાં તેના ઘટાડાના ગુણધર્મોને પણ જાળવી રાખે છે.
ડીટીટીનો ઉપયોગ પ્રમાણમાં સરળ છે.સામાન્ય રીતે, ડીટીટીને યોગ્ય બફરમાં ઓગળવામાં આવે છે અને પછી પ્રાયોગિક સિસ્ટમમાં ઉમેરવામાં આવે છે.ડીટીટીની શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા ચોક્કસ પ્રયોગ અનુસાર નક્કી કરવાની જરૂર છે, અને સામાન્ય રીતે તેનો ઉપયોગ 0.1-1 એમએમની રેન્જમાં થાય છે.ઓછી સાંદ્રતા કોષની વૃદ્ધિ પર પ્રતિકૂળ અસરો ઘટાડી શકે છે અને લક્ષ્ય પ્રોટીનની અતિશય અભિવ્યક્તિને કારણે સાયટોટોક્સિસિટી ઘટાડી શકે છે.ઉચ્ચ સાંદ્રતા કોશિકાઓના અતિશય મેટાબોલિક બોજનું કારણ બની શકે છે, જે કોષની વૃદ્ધિ અને અભિવ્યક્તિ કાર્યક્ષમતાને અસર કરે છે.
શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા નક્કી કરવાની રીત વિવિધ સાંદ્રતામાં IPTG ઇન્ડક્શન પરીક્ષણો હાથ ધરીને લક્ષ્ય પ્રોટીનના અભિવ્યક્તિ સ્તરનું મૂલ્યાંકન કરી શકે છે.IPTG સાંદ્રતાની શ્રેણી (દા.ત. 0.1 એમએમ, 0.5 એમએમ, 1 એમએમ, વગેરે) નો ઉપયોગ કરીને નાના-પાયે સંસ્કૃતિ પરીક્ષણો કરી શકાય છે અને વિવિધ સાંદ્રતા પર અભિવ્યક્તિ અસરનું મૂલ્યાંકન લક્ષ્ય પ્રોટીનના અભિવ્યક્તિ સ્તરને શોધીને કરી શકાય છે (દા.ત. વેસ્ટર્ન બ્લોટ અથવા ફ્લોરોસેન્સ ડિટેક્શન).પ્રાયોગિક પરિણામો અનુસાર, શ્રેષ્ઠ અભિવ્યક્તિ અસર સાથેની સાંદ્રતાને શ્રેષ્ઠ એકાગ્રતા તરીકે પસંદ કરવામાં આવી હતી.
આ ઉપરાંત, તમે સમાન પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓ હેઠળ સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતી IPTG સાંદ્રતા શ્રેણીને સમજવા માટે સંબંધિત સાહિત્ય અથવા અન્ય પ્રયોગશાળાઓના અનુભવનો સંદર્ભ પણ લઈ શકો છો અને પછી પ્રાયોગિક જરૂરિયાતો અનુસાર ઑપ્ટિમાઇઝ અને એડજસ્ટ કરી શકો છો.
એ નોંધવું અગત્યનું છે કે શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા વિવિધ અભિવ્યક્તિ પ્રણાલીઓ, લક્ષ્ય પ્રોટીન અને પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓના આધારે બદલાઈ શકે છે, તેથી કેસ-દર-કેસ આધારે ઑપ્ટિમાઇઝ કરવું શ્રેષ્ઠ છે.
સારાંશમાં, ડીટીટી એ સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતું ઘટાડતું એજન્ટ છે જેનો ઉપયોગ પ્રોટીન અને અન્ય બાયોમોલેક્યુલ્સમાં ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડ ઘટાડવા અને એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ અને સ્થિરતાને સુરક્ષિત કરવા માટે થઈ શકે છે.બાયોકેમિસ્ટ્રી અને મોલેક્યુલર બાયોલોજીના પ્રયોગોમાં તેનો વ્યાપક ઉપયોગ થયો છે.
પોસ્ટ સમય: સપ્ટેમ્બર-28-2023