ડિથિઓથ્રેઇટોલ (DTT) એ સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતું રિડ્યુસિંગ એજન્ટ છે, જેને ન્યૂ ગ્રીન એડિટિવ તરીકે પણ ઓળખવામાં આવે છે. તે બે મર્કેપ્ટન જૂથો (-SH) સાથેનું એક નાનું મોલેક્યુલર કાર્બનિક સંયોજન છે. તેના રિડ્યુસિંગ ગુણધર્મો અને સ્થિરતાને કારણે, DTTનો ઉપયોગ બાયોકેમિસ્ટ્રી અને મોલેક્યુલર બાયોલોજી પ્રયોગોમાં વ્યાપકપણે થાય છે.
ડીટીટીની મુખ્ય ભૂમિકા પ્રોટીન અને અન્ય બાયોમોલેક્યુલ્સમાં ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડ ઘટાડવાની છે. ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડ પ્રોટીન ફોલ્ડિંગ અને સ્થિરતાનો એક મહત્વપૂર્ણ ભાગ છે, પરંતુ અમુક પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓમાં, જેમ કે રિડ્યુસિબલ SDS-PAGE વિશ્લેષણ, પ્રોટીન રિકોમ્બિનેશન અને ફોલ્ડિંગ, પ્રોટીનની અવકાશી રચનાને ઉઘાડી પાડવા માટે ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડને બે થિઓલ જૂથોમાં ઘટાડવું જરૂરી છે. ડીટીટી ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડ સાથે પ્રતિક્રિયા આપીને તેમને મર્કેપ્ટન જૂથોમાં ઘટાડી શકે છે, આમ પ્રોટીનની અવકાશી રચના ખોલે છે અને તેનું વિશ્લેષણ અને હેરફેર કરવાનું સરળ બનાવે છે.
ડીટીટીનો ઉપયોગ એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ અને સ્થિરતાને સુરક્ષિત રાખવા માટે પણ થઈ શકે છે. કેટલીક એન્ઝાઇમ-ઉત્પ્રેરિત પ્રતિક્રિયાઓમાં, ઓક્સિડન્ટ દ્વારા એન્ઝાઇમની પ્રવૃત્તિમાં ઘટાડો થઈ શકે છે. ડીટીટી ઓક્સિડન્ટ્સ સાથે પ્રતિક્રિયા કરીને તેમને હાનિકારક પદાર્થોમાં ઘટાડી શકે છે, જેનાથી એન્ઝાઇમની પ્રવૃત્તિ અને સ્થિરતાનું રક્ષણ થાય છે.
β-mercaptoethanol (β-ME) જેવા પરંપરાગત રિડ્યુસિંગ એજન્ટોની તુલનામાં, DTT ને વધુ સુરક્ષિત અને વધુ સ્થિર રિડ્યુસિંગ એજન્ટ માનવામાં આવે છે. તે માત્ર જલીય દ્રાવણમાં સ્થિર નથી, પરંતુ ઉચ્ચ તાપમાન અને એસિડ-બેઝ પરિસ્થિતિઓમાં પણ તેના રિડ્યુસિંગ ગુણધર્મો જાળવી રાખે છે.
DTT નો ઉપયોગ પ્રમાણમાં સરળ છે. સામાન્ય રીતે, DTT ને યોગ્ય બફરમાં ઓગાળીને પ્રાયોગિક પ્રણાલીમાં ઉમેરવામાં આવે છે. DTT ની શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા ચોક્કસ પ્રયોગ અનુસાર નક્કી કરવાની જરૂર છે, અને સામાન્ય રીતે તેનો ઉપયોગ 0.1-1mM ની રેન્જમાં થાય છે. ઓછી સાંદ્રતા કોષ વૃદ્ધિ પર પ્રતિકૂળ અસરો ઘટાડી શકે છે અને લક્ષ્ય પ્રોટીનના વધુ પડતા અભિવ્યક્તિને કારણે સાયટોટોક્સિસિટી ઘટાડી શકે છે. ઉચ્ચ સાંદ્રતા વધુ પડતા કોષ ચયાપચયનું કારણ બની શકે છે, જે કોષ વૃદ્ધિ અને અભિવ્યક્તિ કાર્યક્ષમતાને અસર કરે છે.
શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા નક્કી કરવાનો માર્ગ એ હોઈ શકે છે કે વિવિધ સાંદ્રતા પર IPTG ઇન્ડક્શન પરીક્ષણો કરીને લક્ષ્ય પ્રોટીનના અભિવ્યક્તિ સ્તરનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવે. નાના પાયે સંસ્કૃતિ પરીક્ષણો IPTG સાંદ્રતાની શ્રેણી (દા.ત. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, વગેરે) નો ઉપયોગ કરીને કરી શકાય છે અને વિવિધ સાંદ્રતા પર અભિવ્યક્તિ અસરનું મૂલ્યાંકન લક્ષ્ય પ્રોટીનના અભિવ્યક્તિ સ્તર (દા.ત. વેસ્ટર્ન બ્લોટ અથવા ફ્લોરોસેન્સ ડિટેક્શન) શોધીને કરી શકાય છે. પ્રાયોગિક પરિણામો અનુસાર, શ્રેષ્ઠ અભિવ્યક્તિ અસર ધરાવતી સાંદ્રતાને શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા તરીકે પસંદ કરવામાં આવી હતી.
વધુમાં, તમે સમાન પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓમાં સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતી IPTG સાંદ્રતા શ્રેણીને સમજવા માટે સંબંધિત સાહિત્ય અથવા અન્ય પ્રયોગશાળાઓના અનુભવનો પણ સંદર્ભ લઈ શકો છો, અને પછી પ્રાયોગિક જરૂરિયાતો અનુસાર ઑપ્ટિમાઇઝ અને ગોઠવણ કરી શકો છો.
એ નોંધવું મહત્વપૂર્ણ છે કે શ્રેષ્ઠ સાંદ્રતા વિવિધ અભિવ્યક્તિ પ્રણાલીઓ, લક્ષ્ય પ્રોટીન અને પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓના આધારે બદલાઈ શકે છે, તેથી કેસ-દર-કેસ આધારે ઑપ્ટિમાઇઝ કરવું શ્રેષ્ઠ છે.
સારાંશમાં, DTT એ સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતું રિડ્યુસિંગ એજન્ટ છે જેનો ઉપયોગ પ્રોટીન અને અન્ય બાયોમોલેક્યુલ્સમાં ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડ ઘટાડવા અને એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ અને સ્થિરતાને સુરક્ષિત રાખવા માટે થઈ શકે છે. તેનો બાયોકેમિસ્ટ્રી અને મોલેક્યુલર બાયોલોજી પ્રયોગોમાં વ્યાપકપણે ઉપયોગ થયો છે.
પોસ્ટ સમય: સપ્ટેમ્બર-28-2023